李氏杆菌病是由产单核细胞李氏 (也称李斯特) 杆菌引起的一种人兽共患传染病。家畜主要表现脑膜炎、败血症和妊畜流产; 家禽和啮齿类动物则表现坏死性肝炎和心肌炎; 有的还可出现单核细胞增多症。人主要表现脑膜炎。但无论哪一种病型,其病情均重剧,不可忽视。我国把其定为三类动物疫病。
冰岛在1910年以前已有羊群遭到巨大危害的报道,但当时对其病原尚不了解。自1926年Murray等发现李氏杆菌、Cill (1933) 查明羊转圈病的病因是李氏杆菌以后,才对本病逐渐有所重视。本病分布于世界各国,并且在20世纪80年代以来,人类因食用了被污染的动物性食品而屡发李氏杆菌病,才认识到还是人的一种食源性疾病,受到人们广泛关注。现我国许多地区也有发生。
【病原学】 产单核细胞李氏杆菌 (L.monocytogenes) 为李氏杆菌属 (Listeria)。该属细菌为革兰氏阳性的球杆菌,大小为0.5~2 μm×0.4~0.6μm,无芽孢,不产生荚膜,在20~25℃培养可产生4根周生鞭毛,在37℃至少可产生1根鞭毛。20~25℃能运动,37℃不运动。在抹片中,有的数个菌体聚集成小堆,有的单在或2个菌体排成“V”字形或平行并列。
本菌为需氧或兼性厌氧菌,在普通琼脂上37℃培养20 h,形成微细圆形菌落。菌落可产生光滑型和粗糙型变异,在粗糙型菌落上可见到20μm或更长的纤丝; 在含有青霉素的培养基中可形成L形。培养基中加入血液葡萄糖时,发育更好,且菌落周围形成狭窄的β型溶血环,此特征可与棒状杆菌、猪丹毒杆菌鉴别。在各种培养基上,发育初期的菌落于暗的斜射光线下观察时,呈特征淡蓝绿色光泽。此外,本菌在4℃下可缓慢增殖,约需7天,因此可利用低温增菌法从病料中分离本菌。
李氏杆菌与葡萄球菌、肠球菌、化脓棒状杆菌及大肠杆菌等有共同抗原。本菌具有13个血清型,分别为1/2a、1/2b、1/2c、3a、3b、3c、4a、4ab、4b、4c、4d、4e和7。各型对人类都可致病,但以1a、1b和4b多见。这些不同的血清型与病原性的强弱或各种病型间未发现有直接联系。本菌病原性一般较弱,除新生动物外,不能突破无损伤的皮肤、黏膜而侵入体内。
李氏杆菌耐酸不耐碱,常用消毒药5~10min能杀死本菌; 对热的耐受性比大多数无芽孢杆菌强,常规巴氏消毒法不能将其杀灭,在65℃湿热中经40 min才能灭活。在培养基上可存活几个月; 抗干燥能力强,在干粪中能存活两年以上。在饲料中,夏季存活1个月,冬季可存活3~4个月。在pH5.0~9.0的环境,一年后仍可检出。在4℃耐盐高达30.5%。
体外试验对氨苄青霉素等敏感,对土霉素等敏感性差,对磺胺类药、枯草杆菌素和多黏菌素有抵抗力。
【流行病学】
1.易感动物 本病的易感动物很广泛,已查明有42种哺乳动物和22种鸟类易感。自然感染发病的家畜中以绵羊、猪和家兔较多,牛、山羊次之,马、犬、猫较少; 在家禽中,以鸡、火鸡、鹅较多,鸭较少; 啮齿类动物特别是鼠类和一些野兽、野禽、鱼、甲壳类等均能自然感染,且常成为本病病原体在自然界中的贮存宿主。人可感染发病,而5%~10%的人是无症状健康带菌者。实验动物中,家兔和小鼠易感性最强,豚鼠和大鼠次之。
2.传染源 患病和带菌动物是本病的传染源。由患病动物的粪、尿、乳汁、精液以及眼、鼻、生殖道的分泌物,都曾分离到本菌。健康动物可从肠内容物检出本菌,但检出率较低,一般不致成为传染源。过去已经明确的家畜李氏杆菌病病例,几乎都是因为喂了有该菌混入而繁殖的青贮饲料而引起发病的,这说明健畜排出的李氏杆菌,在外界得到增殖机会也能成为传染源。健康带菌的人,可能是重要的传染源。据报道,在丹麦、瑞典等国,健康带菌者约占人口的1%~4%。
3.传播途径 主要通过粪便—口腔途径传播,经呼吸道、眼结膜及破损的皮肤、黏膜感染是次要的途径。污染的土壤和饲料是主要传播媒介。pH高于5.5的劣质青贮饲料是该病的重要传播来源,当细菌在青贮饲料(玉米秆、青草、谷物、豆科植物) 中增殖后,被动物采食时,则可经消化道感染发病。
人主要经粪—口途径传播。孕妇感染后,可通过胎盘或产道感染胎儿或新生儿; 眼或皮肤直接接触病畜,也可能发生局部感染。
4.流行形式及因素 本病的发生有一定的季节性。主要发生在冬季或早春,多见于饲喂青贮饲料的反刍动物。据我国部分地区统计,一般以3~4月发病较多,7~9月发病停息,10~11月又逐渐增多。
本病通常为散发,发病率虽较低,但病死率很高。各种年龄的动物均可感染发病,但以幼龄动物较易感,发病较急,妊娠母畜也较易感染。气候剧变、内寄生虫或沙门氏菌感染等,能促使本病的发生和发展。
人的李氏杆菌病,以新生儿及40岁以上孕妇及免疫功能有缺陷的人群易感。本病一般为散发,但在婴儿室、病室等处,偶可发生小流行。
【临诊症状】 潜伏期为2~3周,有的可能只有数天,也有的长达2个月。临诊以发热,神经症状,孕畜流产,幼龄动物、啮齿动物和家禽呈败血症为特征。不同种动物的临诊表现有差异。
绵羊和山羊: 病初体温升高至40.5~41.5℃,不久降至常温。病羊精神沉郁,食欲减退或不食。病后第2~3天,出现神经症状。病羊眼球突出,目光呆滞,视力障碍或完全失明,一侧或双侧耳麻痹(常见的早期症状),唇震颤。由于咀嚼和吞咽麻痹而不能摄食、饮水。大量流涎。多数病羊呈现长时间的圆圈运动。后期病羊卧地不起,四肢作游泳状,颈强直,角弓反张,神志昏迷。一般经3~7天死亡。较大的羊病程可达1~3周,成年羊症状不明显,妊娠母羊常发生流产,小羔羊常呈急性败血症而死亡,病死率很高。
牛: 成年牛主要表现为神经症状。病牛沉郁与狂暴症状交替出现。1~2周后全身衰弱,卧地呈昏迷状态,头颈因一侧性麻痹而偏向一侧,并沿该方向作圆圈运动,遇到障碍以头抵撞。有时吞咽肌麻痹而大量流涎。病后期侧卧并不改变其体位,如果强行翻身,又迅速翻过来,最终死亡。妊娠母牛常发生流产。水牛表现突然发生大脑炎,病程短,病死率比黄牛高。病牛的其他症状,大致与羊相似。
猪: 病初体温稍高,至后期体温下降,保持36~36.5℃。意识障碍,运动失调,作圆圈运动,或无目的地行走,或不自主地后退,或以头抵地不动。有的头颈后仰,前肢或后肢张开,呈典型的观星姿势。肌肉震颤、强硬,颈部和颊部尤为明显。有的表现阵发性痉挛,口吐白沫,侧卧地上,四肢乱动。有的在病初两前肢或四肢发生麻痹,不能起立。一般经1~4天死亡,长的可达7~9天。较大的猪有的身体摇摆,共济失调,步态强拘,有的后肢麻痹,不能起立,拖地而行。病程可达1个月以上。
仔猪多发生败血症,体温显著上升,精神高度沉郁,食欲减少或废绝,口渴。有的表现全身衰弱,僵硬,咳嗽,腹泻,皮疹,呼吸困难,耳部和腹部皮肤发绀。病程约1~3天,病死率高。妊娠母猪常发生流产。
马: 极为罕见。病马主要表现脑脊髓炎症状。体温升高,感觉过敏,容易兴奋。共济失调,四肢、下颌和喉部不全麻痹,意识和视力显著减弱。病程约1个月。幼驹还见有轻度腹痛、不安、黄疸和血尿等症状。
家禽: 主要为败血型。表现精神沉郁,停食,下痢,短时间内死亡。病程较长的,可能表现痉挛、斜颈等神经症状。
兔: 常急速死亡。有的表现精神委顿,独蹲一隅,不走动。口吐白沫,神志不清。神经症状呈间歇性发作,发作时无目的地向前冲撞,或转圈运动,最后倒地,头后仰,抽搐,以至于死亡。其他啮齿类动物通常表现败血症症状。
【病理变化】 有神经症状的病畜,脑膜和脑组织可能有充血、炎症或水肿的变化,脑脊液增加,稍浑浊,含很多细胞。脑干变软,有小脓灶,血管周围有以单核细胞为主的细胞浸润。最特征的变化仅见于脑干部,脑组织切片可见中性粒细胞和单核细胞灶状浸润及血管周围单核细胞管套。此外,还可以有规律地在三叉神经的一定分支中出现急性神经炎。
败血症的病畜,有败血症变化,肝脏有坏死灶; 家禽有心包炎,心肌和肝脏有小坏死灶或广泛坏死。
家兔和其他啮齿类动物: 肝脏有坏死灶,血液和组织中单核细胞增多。反刍兽和马不见单核细胞增多,而常见中性粒细胞增多。流产的母畜可见到子宫内膜充血以至广泛坏死,胎盘子叶常见有出血和坏死。
【诊断】 根据流行特点、临诊症状及病理学变化可做出初步诊断。本病表现为脑膜脑炎,有特殊的神经症状,有的呈现败血症,孕畜流产; 血液中单核细胞增多,呈现散发,发病率低,病死率高,多发于冬春季节,剖检见脑及脑膜充血、水肿,肝有小坏死灶以及败血症变化,脑组织切片可见中性粒细胞和单核细胞灶状浸润及血管周围单核细胞管套等,可作为诊断的重要依据。确诊需进行细菌学分离与鉴定。
病料样品采集: 李氏杆菌病脑炎的病灶分布局限于脑干部,所以应在此部位采集一部分脑实质。败血症病例,不必限于特定脏器,但常选肝脏和脾脏。流产病例,采取流产胎儿消化器官内容物及母畜的阴道分泌物。
1. 病原学检查
(1)镜检 病料制成涂抹标本,作革兰氏染色、镜检,如见有革兰氏阳性,单在、成对或呈 “V”字形排列的两端钝圆的细小杆菌 (比猪丹毒杆菌略粗),可做出初步诊断。
(2) 培养 将病料研磨成乳剂,接种于葡萄糖血清 (或血液) 琼脂平板上培养,形成露滴状小菌落; 在暗的斜射光线下观察,菌落发淡蓝绿荧光,有助于鉴别。若病料中污染有杂菌时,可利用含有亚碲酸钾的鉴别培养基培养,能形成黑色菌落,有狭窄的β型溶血现象; 或将病料乳剂保留于4℃ (低温增菌) 中,每隔一定时间接种于加有多链丝菌素和0.05%亚碲酸钾或3.75%硫氰酸钾的液体培养基中进行预先培养,然后再接种到适当的固体培养基上,待菌落生长,约2个月后可能长出细菌。这可能是李氏杆菌的生长型和L型之间易于转化的缘故(Brem和Eveland,1958)。这样,能提高检出率,但不易获得早期诊断。
(3) 动物接种 将细菌悬液滴入家兔、豚鼠或小鼠的结膜囊内,经24~48 h可发生明显的脓性结膜炎、角膜炎,兔反应明显。几天后分泌物减少,结膜炎症和角膜浑浊仍存在,特别是角膜炎可持续数周至数月。
小鼠腹腔内接种时,1~2天内死于败血症。另外,在口腔黏膜上制作轻微伤口,其上涂细菌悬液,7~10天后出现特殊的神经症状。
(4) 荧光抗体法 病料涂片用丙酮固定后,作荧光抗体直接法染色。李氏杆菌呈现具有荧光的球菌与双球菌状形态特征。
2.血清学试验 凝集反应、沉淀反应及补体结合反应,可用于本病的诊断,但与金黄色葡萄球菌、肠球菌等有交叉反应,而且许多临诊感染明显的动物无抗体反应,故血清学试验的意义不大。
3.鉴别诊断 当牛、羊患本病时,应注意与牛、羊脑包虫病鉴别。牛、羊的脑包虫病虽有圆圈运动或斜走等神经症状,但体温不高,病程发展很慢,剖检时见有脑包虫。
在猪患本病时,应注意与其他有神经症状的疾病,特别是狂犬病相鉴别。但狂犬病有攻击性,脑组织切片检查可见脑神经节细胞胞浆内有内基氏小体。
人的李氏杆菌病,可根据临诊症状和流行病学材料对本病作初步诊断,确诊有待于细菌学检查。还须注意与结核性或病毒性脑膜炎及其他神经系统疾病作鉴别诊断。
【防控措施】
1.预防 本病尚无有效的菌苗,Sadov等 (1972) 用致弱的李氏杆菌“AUF”菌株接种绵羊,在10个月内有100%的保护力。1976年在养兔及养貂场试验,防止了本病的进一步传播,而且无任何明显的反应。目前,有实验性菌苗应用,但无形成商品。预防的主要措施在于管理。
(1)加强饲料卫生管理 家畜生活环境难免被本菌污染,随粪便排出的菌量虽不多,达不到引起发病的数量,但本菌能在低营养、低温条件下发育繁殖,从而可引起人、畜感染发病。青贮饲料,由于乳酸的酸度,保持了饲料的香味,也可防止杂菌侵入繁殖,但如青贮池管理不当,青贮饲料遇到雨、雪时,则其酸度降低,就有变成李氏杆菌良好培养基的危险。此外,干草、秸秆类在水浸状态下,也会成为本菌繁殖场所。所以,加强饲料的卫生管理,是预防李氏杆菌病的主要措施。
(2) 驱除鼠类和其他啮齿类动物,消灭体外寄生虫,不从发病地区引入畜禽。
发生本病时,应将病畜隔离治疗。被污染的畜舍、用具应彻底消毒,防止病菌散布; 对病畜的乳、肉及其他产品必须进行无害化处理; 同时应尽力查出原因,采取防控措施。如怀疑是青贮饲料致病时,应改用其他饲料。将未受感染的动物尽早隔离至清净地方,有效控制疫情的发展。
2.治疗 抗生素对李氏杆菌病有很好效果。但对家畜李氏杆菌脑炎,尽管进行了早期治疗,但效果不稳定,成功率较低。这是因为李氏杆菌脑炎的病灶,是在脑干实质内,远比李氏杆菌脑膜炎时神经障碍的程度严重得多,而且这种机能障碍是不能用抗生素使其恢复的。
【公共卫生学】 人对李氏杆菌有易感性,感染后可呈现多种症状,但常见者为脑膜脑炎,其次为妊娠感染、败血症及局部感染等。脑膜脑炎症状为突然起病,有剧烈头痛、眩晕、恶心、发热、颈项强直等脑膜刺激症状; 部分病人有呕吐、惊厥、易激怒及共济失调等类似其他化脓菌所致的脑膜炎及脑炎症状。重症可于24~48 h内昏迷。少数起病慢,病程较长而有反复。如病变累及脑实质,则可有脑炎及脑脓肿表现,发生惊厥、偏瘫、脑疝等症状。个别病人可发生脑干脑炎而呈复视,发音或吞咽困难,面神经麻痹及偏瘫等。有脑膜炎者,多数同时有败血症症状。
新生儿的李氏杆菌病有早发型和迟发型两种。早发型是产后立即发病,或于生后2~5天内发病,病儿一般为早产儿,主要表现为呼吸道和中枢神经系统症状; 迟发型在产后1~3周发病,主要表现脑膜炎症状。孕妇感染本菌出现类似流感症状,并导致胎儿流产。兽医师及从事相关职业人员易患皮肤型李氏杆菌病,抵抗力降低时则发展为全身性感染。
防控应采取以下措施:
①养成不饮生水、生乳,不食生鱼、生肉的卫生习惯;
②病畜、禽肉不可作腌肉食用,因盐腌不能杀死本病原菌;
③牧区和农牧兼有的农村,要教育儿童不可在畜舍周围玩耍;
④经常注意灭鼠和杀灭吸血节肢动物;
⑤兽医及有关职业人员应做好个人防护。