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犬异位性皮炎(Canine Atopic Dermatitis,CAD)之四
书籍:[db:科目]    来源:辈宠网

过敏试验

犬异位性皮炎(CAD)诊断依赖于病史、身体检查以及排除其他瘙痒性皮肤病.确诊后一旦决定使用脱敏治疗(ASIT),则需要进行过敏试验,用来筛选抗原。过敏试验有两种:皮内试验(IDT)和抗原特异性血清学实验(ASIgES),可以根据具体情况选择其一。二者各有利弊,存在一定的假阳性和假阴性结果,需要临床兽医根据病史和症状选择适合的试验方案,并合理的判读试验结果。脱敏治疗是指给过敏动物不断注射抗原提取物,用以减轻再次接触空气抗原时的症状。通常对犬进行抗原的免疫治疗,能够很好地缓解犬AD的临床症状。过敏试验和脱敏治疗早已在国际上广泛应用,希望在不久的将来中国大陆的皮肤专科兽医能够掌握这些技术,为过敏动物提供更先进的医疗支持。

皮内试验

实际上皮内试验是在模拟异位性皮炎---使皮肤接触空气抗原,并观察其反应。试验的特异性为50-90%(排除其他瘙痒症特异性将提高),敏感性为90%。对于季节性发病的动物,试验时间最好选择在症状出现的2-3个月后。

操作程序:

1.  将动物镇静并侧卧。赛拉嗪(Xylazine)0.5-0.75mg/kg,或美托咪定(medetomidine)10-20μg/kg,是适合的镇静剂。很多其他的麻醉或镇静剂会降低皮内试验的反应性。

2.  将胸廓轻柔剃毛,面积为15×10cm。

3.  预先用黑色记号笔标出注射点。

4.  将每种抗原以0.05ml的剂量注射入标记点对应的真皮内,同样剂量的组胺(1:100,000)作为阳性对照,生理盐水作为阴性对照。

5.  10-20分钟后读取反应结果。皮肤会出现风疹样变化(见图1),阳性对照为4分,阴性对照为0分。其他注射部位通过风疹面积、发红程度、隆起高度与阳性和阴性对照相比,人为给予评分。最高分为4分,最低分为0分。

6.  少数病例会在24-48小时后出现迟发型变态反应,需要主人在家观察,或住院观察。

7.  最为脱敏治疗的抗原种类不要超过10种,注射剂量从低浓度向高浓度逐渐递增,注射间隔逐渐拉长,从最初的间隔一天,到最后可能保持在10-20天注射一次。通常为终生性治疗。


图1.皮内试验,抗原注射后皮肤风疹形成。

皮内注射时注射技术问题导致局部刺激,可能引起假阳性反应,例如针头损伤、注入空气和抗原容量大于对照组。假阴性反应可能缘于药物干扰(例如糖皮质激素、抗组胺药,降血压药等)。理论上讲,应激可以导致自体糖皮质激素升高,使皮肤过敏试验无反应。注射技术错误,例如注射于皮下而不是皮内;或是抗原量过低,让皮肤不能形成应有的反应;抗原过期或过度稀释等因素均使结果为假阴性。

皮内试验前要停用所有糖皮质激素和抗组胺药(见表1);试验时需要剃毛,并镇静动物;另外需要购买多种抗原试剂,并合理保存;医生判读结果的能力需要特殊的培训。由于上述原因,在欧美等国家,做皮内试验的病例需要转诊至皮肤病专科医院。
目前世界知名的犬过敏原生产公司有Greer、Heska、Artuvetrin等。国际卫生组织已经建立了人医用抗原标准化,而兽医用抗原则没有标准化。因此无从得知哪家公司的产品(包括人医和兽医)更有优势。兽医临床常将水性抗原提取物用于皮内试验。抗原的储存基质是甘油。抗原均为浓缩制剂,更适合作为疫苗,用于脱敏治疗,稀释后才能用作皮内试验的试剂。通常稀释后的抗原保存时间变短,即使正确存放,通常必须在8周内用完。

皮肤病医生根据当地的植物群等选择抗原,抗原种类越多越好,当然费用也会随之升高。当地抗原的信息可以到过敏实验室、兽医皮肤病专科医院、人医变态反应科室和气象局等处了解,也可以查阅兽医过敏性皮肤病的文献和教科书。需要注意的是,对人重要的抗原未必对犬也同样重要。即使植物和传粉很确定的区域,植被和气候也存在变数。所以应该每年评估皮内试验用抗原的种类,并且制定新的抗原种类,很少出现阳性反应的抗原应该剔除掉。大量环境抗原涉及于犬AD的发病机制中。

众多专家和学者通过皮内试验总结了AD犬反应阳性的空气抗原种类。常用抗原包括屋尘、表皮螨属、各种皮屑、树种、草和杂草、花粉、霉菌及其他混杂抗原。表皮螨属包括:美洲尘螨(也称粉尘满)、欧洲尘螨(也称房尘螨或屋尘螨)、粗脚粉螨、腐食酸螨;上皮抗原包括:人上皮、马上皮、猫上皮、犬上皮、绵羊上皮、混合羽毛、鼠上皮、兔上皮、豚鼠上皮、家禽上皮、金丝雀上皮等;树种包括:桦树、柳树、枞树、雪松、槭树、胡桃、榛子、桤木、橡树、山毛榉、榆树、山胡桃、白杨、红雪松、白松、小无花果树、栎树、柏树、橄榄树、接骨木等;草类包括:梯牧草、肯塔基兰草、狗牙根、车前草、小糠草、羊茅草、小麦、大麦、玉米、豕草、菸草、艾蒿、荨麻、刺藜、苍耳、鸭茅等;花粉包括:黄菊、苜蓿、假豕草、蒲公英、向日葵、玫瑰、金盏花、野菊花、雏菊、芥菜、红三叶草等;霉菌类包括:链格孢属、曲霉、芽霉菌、单孢枝霉、毛霉、疱霉、假头孢子、葡萄孢、根霉、长蠕孢菌、根生菌、青霉菌、附球菌、梭霉菌、分枝孢子菌、弯孢霉、红酵母、大麦黑粉菌、燕麦黑粉菌、小麦黑粉菌;其他还包括:烟草、棉花、报纸、木丝绵、蟑螂等。很多厂家在生产抗原时,会将多种同类抗原混合,合并为一种试剂。

抗原的种类繁多,且地理环境和生活方式的不同,不同地区的AD犬的阳性反应抗原差异很大,非常分散,很难制定统一的抗原检测套餐。例如,猫上皮是广泛分布的抗原,AD犬对此抗原的反应率在某地为71%,而另一地为2%。同样世界性分布的曲霉,不同调查的发现从84-0%。

各地存在的抗原致敏率的差异可能是由于不同的生产厂家、不同的生产批次,以及不同的抗原生物活性导致的。另外,皮内试验操作时的剂量和浓度也不尽统一,抗原制剂的佐剂也可能引发皮肤反应。皮内试验的假阴性或假阳性结果随之出现。
总结皮内试验检测的抗原致敏率,没有发现一种特殊的抗原能够被确定一定致敏,也没有一种抗原能够完全被排除出致敏行列。总的来说,尘螨类和上皮类在欧美的调查中都是致敏率很高的抗原,而花粉和霉菌在美洲重要,在欧洲却相对次要。

血清学过敏试验

血清学试验是通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中特异性IgE的浓度。世界上很多兽医商业化实验室提供这项检测。主要步骤是:将抗原吸附于底物,加入动物血清(含有特异性IgE抗体)与抗原一起孵育,最后加入反应素结合抗原抗体复合物。反应素主要是三类:单克隆抗体、多克隆抗体和重组IgE受体片段。各家商业实验室在血清试验中所使用的抗原、底物和反应素均不相同,目前世界上没有制剂和操作程序标准化和全面指控。血清学试验的结果受到多重因素的影响。暴露于抗原可刺激血清的免疫球蛋白增加,异位性皮炎犬在不同季节血清特异性IgE水平不同。因此皮肤病医生经常选择当地室外抗原浓度最高的季节为动物抽血检测特异性IgE水平。还有一些干扰免疫系统的因素,例如疫苗注射后能使血清特异性IgE水平增高。试验中底物、抗原、抗体和反应素的相互结合力很大程度决定了试验结果。另外,抗原制剂的选择和制作取决于不同的工艺和抗原取材。本试验的假阳性反应的出现可能由于试验中检测了除了IgE以外的免疫球蛋白;健康的无过敏症的犬也能被检测到抗原特异性IgE,而此试验非常敏感,能检测到极低水平的特异性IgE,从而得出某种抗原过敏的假阳性结果。如果异位性皮炎犬的过敏介质不仅是IgE,还有其他因素是血清试验无法检测的,则会出现假阴性反应。鉴于上述原因,在美国有人尝试将相同血清样本送往不同商业实验室,得出的结论差距较大,甚至相同样本连续两天送往同一实验室,得出的阳性反应结论只有62%相同。血清学试验的最大优势是方便易行,样本的采集不需要皮肤病专科医生,只需抽血后送往商业实验室即可。无需剃毛和镇静,甚至有的商业实验室还宣称无需停服药物,不会妨碍过敏犬的治疗。

然而通常血清学试验不是过敏试验的首选,除非动物的躯干和胸廓存在大面积的瘢痕或苔藓化,不适合皮内试验。早些年比较流行在临床使用快速ELISA试剂盒,检测血清抗原特异性IgE总和的水平,目的是为了接下来的过敏试验做筛查。然而由于特异性和敏感性差,近几年此类筛查试验已经慢慢退出国际市场。

特别值得一提的是,食物抗原在犬猫的皮内试验和血清学过敏原检测上的敏感性和特异性均不理想,即使专业的实验室也很难提供可信的检测结果。因此,食物排除试验(Elimination diets,Food trial)至今为止是食物过敏的唯一可靠检测办法。

参考文献
[1] Kathy C. Tater ,Allergy Testing for Canine AtopicDermatitis,Journal of Small Animal Dermatology for Practitioners – Vol 1 No 1 Dec. 2008,16-19.
[2] Andrew Hillier,The ACVD task force on canine atopic dermatitis (XVII): intradermal testing Veterinary Immunology and Immunopathology 81 (2001) 289-304.

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