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犬子宫积脓及内毒素的测定
书籍:[db:科目]    来源:辈宠网

一、子宫积脓简介:

子宫积脓是指发情间期内脓性物质在雌性犬猫的子宫腔内蓄积。子宫积脓是子宫腔和子宫内膜的疾病, 最终会导致子宫壁的完全增厚并会引起动物的全身症状。[1]

1子宫积脓的分类

根据发病后子宫颈的开放程度, 子宫积脓可以分为开放型和闭锁型两类。开放型子宫积脓的明显症状就是有血样或黏液脓性分泌物从患病动物的阴道流出。这种情况通常出现在正常发情后4~ 8周。其他常见的临床症状还有嗜睡、精神沉郁、食欲不振、多尿、多饮, 以及呕吐等等。由于没有明显的阴道分泌物, 因此闭锁型病例在确诊时病情一般都已经十分严重了, 患病动物可能发生日益严重的脱水、休克、昏迷, 甚至死亡。

根据子宫的组织学变化将子宫积脓分成四类:

   第一类是子宫内膜腺囊性增生,此类子宫积脓无明显的临床症状,无炎症迹象,主要是发情周期不正常,患犬年龄在3~12 岁之间,平均为(7. 1 ±2. 4) 岁。
   第二类为子宫内膜明显的囊性增生,浆细胞浸润,子宫内膜发生退行性变化,阴道出现粘液性分泌物,阴门肿胀,子宫膨大。患犬的平均年龄在4~11 岁之间,平均为(7. 2 ±1. 9) 岁。
   第三类为子宫内膜的囊性增生并伴有急性炎症,这种是典型的临床型子宫积脓。患犬精神不振,食欲不佳,发热,腹腔下垂,子宫增大,白细胞增多,血沉率增加。此类子宫积脓多发生在发情后10~15 d,患犬的平均年龄在4~13 岁之间,平均为(8. 0 ±2. 2) 岁。
   第四类为亚临床型子宫积脓,发生率很低,无临床症状,多是第一类子宫积脓未及时治疗而持续很长时间的结果,患犬具有发情后期不正常病史,并且都有纤维性子宫肌层和子宫内膜萎缩。这些变化的结果使子宫变得脆弱。患犬的平均年龄为(11. 8 ±1. 7) 岁。[2][3]

2病因
   子宫积脓发病外部原因:
   子宫积浓继发于化脓性子宫内膜炎及急性慢性子宫内膜炎,化脓性乳房炎及其他部位化脓灶的转移。子宫因感染而敏感,子宫颈持续闭锁或子宫肌肉松弛均为发病外部原因 。
   2.1 发情后的感染 发情后外阴肿胀,子宫内膜脱落、出血,使生殖道抵抗能力降低,同时犬常站坐于地面,往往使阴部被地面的细菌等病原微生物污染,如果主人不注意清洗易造成感染。另外,犬在配种时,动物主人往往在配种前不清洗公犬、母犬的生殖器官,造成配种时细菌感染,引起子宫化脓。
   2.2 激素与疾病 母犬激素失调及患卵巢疾病(如卵巢囊肿、卵巢肿瘤等) 使犬长时间处于激素失调的状态,由于雌激素分泌过多,子宫内膜分泌液同时也增加,分泌液中含有大量白细胞和蛋白,白细胞分解后形成的脓球积存在子宫内造成子宫感染[6] 。药物使用不当也可引起感染,在治疗某些疾病时,大剂量应用地塞米松及其他类固醇药物时,也会引起子宫化脓。
   2.3 产后感染 生产不顺及死胎,胎衣存留不净均可造成子宫感染而引起子宫化脓性炎症。
   子宫积脓发生的内在原因:
   子宫积脓发生的内在原因与雌、孕激素有关。该病常发于发情后期,此时孕酮促进子宫内膜的生长而降低子宫平滑肌的活动,最终发展为囊性子宫内膜增生,使子宫的分泌物积聚。孕酮还可以抑制白细胞抵抗细菌感染的作用,被感染子宫的子宫内膜和子宫肌层内存在特异的细菌受体,理论上也增加了细菌在子宫内建群的可能性,使阴道内的条件致病菌或外源性细菌引起致病。埃希氏大肠杆菌是最常见的病原菌,其次有链球菌、葡萄球菌、巴斯德菌、变形杆菌和假单胞菌等 。犬子宫积脓的发生也与使用黄体酮有关。卵巢子宫切除术后剩余的子宫组织也可发生本病。雌激素可以加强孕酮对子宫的刺激作用,所以在发情间期,给予外源性雌激素可以增加发生子宫积脓的危险。[4]

3发病机理
   有人曾经推测,雌激素对子宫积脓的发生并不重要,而黄体分泌的孕酮起重要作用。然而,现已知道,只有雌激素对子宫内膜的预作用,才能导致后来的积脓变化。

   排卵后,黄体分泌孕酮,子宫在孕酮的前期作用下发生囊性子宫内膜炎,如果有细菌存在,就可发生脓性子宫内膜炎。然而,经常发生的是粘膜性积脓,而不是真正的子宫积脓。脓性子宫炎,特别是慢性的病例,子宫腔内有大量液体,外周血液中白细胞数量增多,使前列腺素释放。尽管前列腺素能刺激子宫的收缩,但还不足以使子宫排除积液。由于积液的量和分泌持续的时间等原因不能使子宫积液排出而发病。此时子宫的病变有可能影响肾脏功能,使肾功能不全,如前肾病、肾小球病及肾小管浓缩尿的功能降低。脓性子宫炎伴发肾小球损伤,是由于免疫反应的结果。也有人建议,脓性子宫炎时的多饮多尿是由大肠杆菌毒素所致。经口服或经非肠道给予激素可使所有年龄母犬产生子宫疾病,经雌激素诱导的和自然发生的子宫疾病在病程和临床症状方面相似,但是诱导发病时和发情周期的时期无关。此外,少数脓性子宫炎是由于错误应用雌激素所致,如果在性周期的黄体期给予雌激素,就可能导致子宫疾病。[1]

4临床症状
   子宫炎/ 脓性子宫炎的临床症状和疾病的严重程度与病长短、是否发生细菌感染、是否有内毒素、子宫颈的开放程度以及母犬的一般健康状态有关。最初,患犬表现精神不佳,低热,不食,多饮和多尿。慢性病例,患犬嗜眠,腹部下垂,某些犬只表现出发情周期不正常或不孕,协助诊断的信息包括母犬年龄超过6 岁,近期给过雌激素等。患亚临床子宫积脓的犬,病程较长,需几个月时间才发展成有明显临床症状的疾病,这些犬阶段性地出现阴道分泌,也可能出现血沉率增加和轻度的白细胞数增多。用手经腹壁触摸子宫能发现子宫均匀膨大,当子宫极度膨大时,触诊的作用不大,因为积脓子宫无弹性,此时触诊必须谨慎。以免造成子宫破裂。
   有些急性子宫积脓患犬,血项变化明显,有助于诊断,白细胞计数常超过30 000/ mm3 ,有些具有严重毒血症的患犬白细胞计数降低。此外红细胞沉降速率增加是子宫积脓的又一普遍现象。然而妊娠时,血沉速度也加快,应予以区别,有些患犬
   出现贫血。肾功能减退时,血尿素氮(BUN) 升高,血清蛋白降低,并出现蛋白尿。
   X - 射线拍片有助于诊断,对疑似的子宫积脓病例注射显影剂,如空气,可显现出膨胀的子宫轮廓。[6]

5检查
   5.1 X射线检查
   腹部正照可见腹腔两侧有肿胀扩张的两子宫角,并压迫肠道,使肠道呈竹节状,腹部侧照可见中间有肿胀扩张的子宫角。[4]
   5.2 B型超声波检查
   将犬仰卧保定,于腹壁下部剪毛,暴露皮肤,涂布耦合剂后,把探头垂直接触皮肤,先确定膀胱的位置,然后把探头从子宫颈向两侧的子宫角边移边观察,当探头与腹白线方向平行纵切时,呈现为长方形宽径的液性暗区,上下有明显的壁相隔使用A/ A 模式观察两侧子宫时,可观察到两侧积有脓的子宫,当改变探头的位置与腹白线垂直横切
时,即显示多个层叠相向的类圆形的液性暗区, 未发现有游离腹水现象, 确诊为子宫积脓。[5]

6治疗
   犬子宫积脓常见的治疗方法有保守疗法和手术疗法。
   6.1 保守疗法
   闭锁型子宫积脓应先开放子宫颈,可以肌肉注射乙烯雌酚,每天1次,0. 5 mg/ 次·d - 1 ,连续使用3 d ,以促进子宫颈松弛开放,便于脓汁排出。也可肌肉注射缩宫素促进脓汁排出,每次10 IU ,每天1次,连续使用2~3 d。必要时进行子宫冲洗:氯霉素0.25~1.0 g ,灭菌液体石蜡5~10 ml ,注入子宫,每天1 次,连续使用3 d ;或者0. 05 %高锰酸钾或0. 05 %新洁尔灭或10. 5 %雷夫奴尔液 ,冲洗子宫,隔日1 次,抗菌消炎,给患犬肌肉注射或静脉注射青霉素或头孢等抗生素。
   6. 2  手术疗法
   6. 2. 1 保定与麻醉 动物仰卧保定,吸入麻醉。
   6. 2. 2 术式 腹下部剃毛,消毒,在脐孔与耻骨前端的腹白线处作6~10 cm 长的切口,打开腹腔,手指伸进腹腔将膨大的子宫角取出于切口之外,分别将两侧的卵巢动静脉进行双重结扎,在结扎交接部剪断,分离子宫韧带,在子宫体的部位用钳固定进行双重结扎,将子宫体连同子宫角一同摘除,子宫体的断端用剪刀将黏膜剪除,用灭菌生理盐水冲洗断端后,用灭菌纱布擦干,撒布抗菌素粉,最后将子宫体断端的黏膜肌层进行包埋缝合,送回腹腔,常规缝合腹腔。
   6. 2. 3 术后护理

   给予补液和消炎。抗菌素连续用5~7 d ,严重病例还要进行补液,补充营养素和纠正酸碱平衡。注重卫生,防止继发感染。术后7~10 d 拆线。一般病犬术后第2天排出柏油状大便,并开始饮水进流食,第3天精神明显好转,第8天食欲恢复正常。

如果要保留其生殖能力,可以考虑进行药物保守治疗,方法为静脉补液和给予广谱抗生素。但是本病复发率很高,用药物治疗的母犬有2/3以上的在两年内复发。有相当一部分患犬由于长时间的食欲废绝和呕吐,导致脱水而使体质下降,不适宜立即手术,因此应先采用支持疗法,即适当补充体液和能量,调节体内酸碱平衡,同时使用抗生素抑制继发感染,待机体体液、电解质失衡状态得以改善后,再进行手术。细菌感染是引起全身症状的原因,子宫渗出物排除不彻底,全身症状就不会消失,因此术后7~10 d应连续口服抗生素。[3][7]

二、内毒素简介:

内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁中的一种成分,叫做脂多糖。脂多糖对宿主是有毒性的。内毒素只有当细菌死亡溶解或用人工方法破坏菌细胞后才释放出来,所以叫做内毒素。

内毒素不是蛋白质,因此非常耐热。在100℃的高温下加热1小时也不会被破坏,只有在160℃的温度下加热2到4个小时,或用强碱、强酸或强氧化剂加温煮沸30分钟才能破坏它的生物活性。与外毒素不同之处,还有:内毒素不能被稀甲醛溶液脱去毒性成为类毒素;把内毒素注射到机体内虽可产生一定量的特异免疫产物(称为抗体),但这种抗体抵消内毒素毒性的作用微弱。[7]
   内毒素脂多糖分子由菌体特异性多糖、非特异性核心多糖和脂质A三部分构成。脂质A是内毒素的主要毒性组分。不同革兰氏阴性细菌的脂质A结构基本相似。因此,凡是由革兰氏阴性菌引起的感染,虽菌种不一,其内毒素导致的毒性效应大致类同。这些毒性反应主要有:

发热反应。人体对细菌内毒素极为敏感。极微量(1-5纳克/公斤体重)内毒素就能引起体温上升,发热反应持续约4小时后逐渐消退。自然感染时,因革兰氏阴性菌不断生长繁殖,同时伴有陆续死亡、释出内毒素,故发热反应将持续至体内病原菌完全消灭为止。内毒素引起发热反应的原因是内毒素作用于体内的巨噬细胞等,使之产生白细胞介素1、6和肿瘤坏死因子α等细胞因子,这些细胞因子作用于宿主下丘脑的体温调节中枢,促使体温升高发热。

白细胞反应。细菌内毒素进入宿主体内以后,血流中占白细胞总数60-70%的中性粒细胞数量迅速减少,这是因为细胞发生移动并粘附到组织毛细血管上了。不过1-2小时后,由内毒素诱生的中性细胞释放因子刺激骨髓释放其中的中性粒细胞进入血流,使其数量显著增加,有部分不成熟的中性粒细胞也被释放出来。革兰氏阴性菌的伤寒沙门菌是例外,其内毒素使白细胞总数始终是减少状态,目前还不清楚是什么原因。由于绝大多数被革兰氏阴性菌感染的患者血流中白细胞总数都会增加,所以现在医生在诊断前,为了初步区别是细菌性感染还是病毒性感染,常常要化验病人的血液,对白细胞进行总数测定和分类计数。被病毒感染的病人,其白细胞总数和中性粒细胞百分比基本在正常值范围内。
   内毒素血症与内毒素休克。当病灶或血流中革兰氏阴性病原菌大量死亡,释放出来的大量内毒素进入血液时,可发生内毒素血症。大量内毒素作用于机体的巨噬细胞、中性粒细胞、内皮细胞、血小板,以及补体系统和凝血系统等,便会产生白细胞介素1、6、8和肿瘤坏死因子α、组胺、5羟色胺、前列腺素、激肽等生物活性物质。这些物质作用于小血管造成功能紊乱而导致微循环障碍,临床表现为微循环衰竭、低血压、缺氧、酸中毒等,于是导致病人休克,这种病理反应叫做内毒素休克。[8]

三、鲎试验的发现和机制:

1956 年Johns Hoph ins 大学的动物学家Bang 博士发现革兰阴性细菌的粗制品能使鲎的血细胞凝聚而死亡。1963~ 1964 年该大学医学院血液室的L evin 和Bang 合作对细菌引起鲎血凝聚的机制进行了深入的研究, 用提纯的内毒素和鲎血细胞溶解物证明了鲎血凝聚机制是一种酶反应。自从1968 年L evin 和Bang 建立鲎血细胞溶解物试验(LAL Test) 以后, 很快引起了美国FDA 的关注, 1973 年1 月12日发表通告 , 声明鲎试剂属于生物制品, 是一种检测细菌内毒素存在的灵敏指示剂, 可用于医药品生产中间过程的细菌内毒素污染的检测。此后经多位学者在分子水平对鲎血细胞溶解物(L)复杂成分进行的研究, 阐释了凝聚的详细机制: 内毒素在钙、镁二价阳离子的参与下, 首先激活鲎试剂凝固酶系统的C因子, 最后将凝固蛋白原变成凝固蛋白。[10]
四、细菌内毒素检测的方法:

自1980年美国药典第20版收载细菌内毒素试验(bacterio lendotoxins test. BET)以来, 英国药典、德国药典、意大利药典、欧洲药典、日本药局方、中国药典等相继收载了该方法。中国药典1995年版拟收载了12种药品进行细菌内毒素检查。而1995年美国药典第23版收载了471种药品进行细菌内毒素检查, 因此, 我国须加紧对更多的品种进行研究以逐步代替致热原检查(pyrogenlest)。近十余年来,
细菌内毒素试验的方法已取得很大进展, 目前有凝胶法( Gel—clo ttech ique ) , 比浊法(Turbidmet ric assay), 比色法(Co lo rimet ric assay)和免疫学方法( Immuno logy method)。

半定量测定一凝胶法:

试管凝胶法已成为细菌内毒素检查的经典方法。它是根据鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应的机理, 终点判断采用翻转180度的目测法。此法操作较简单, 经济, 不需要专用测定设备,可在0. 03 EUom l 的范围内进行半定量测定。其缺陷为特异性不强, 精密度、定量性较差。

定量测定:

随着鲎试验方法和测定仪器的不断完善, 内毒素测定已向微量定量方向发展。定量测定在常规药品检查、生产过程质控、各种除热原方法的评价、特殊样品的检查(如血液、尿液、脑脊液) 等方面,与凝胶法相比具有灵敏、快捷、准确的特点。据统计,当今美国鲎试剂的应用当中, 超过50%的检查采用了定量方法。

浊度法(比浊法) : 浊度法是利用分光光度计测定凝胶形成过程中伴随的浊度变化, 可分为终点比浊法和动态比浊法。通常在01006~ 300 EU om l 范围内进行定量测定。此法操作简单、快速、灵敏度高、检测范围宽, 但需要精密的专用仪器。

显色基质法(比色法) : 显色基质法是利用凝固酶水解显色底物释放出来的显色基团使吸光度发生变化, 以此进行定量的方法。可分为终点比色法和动态比色法。该方法灵敏度、精密度高, 通常在01006~ 15EU om l 范围内测定, 但仪器和试剂昂贵, 操作比较复杂。目前主要用于血液、体液中的微量内毒素测定。

免疫学方法: 有关免疫学方法的研究报道有酶联免疫吸附检测法(LAL - EL ISA )、火箭免疫电泳鲎试验法(TALR IE)、L 一聚赖氨酸EL ISA 法、双抗体夹心EL ISA 法等。这些方法的特点是特异性、准确性高, 但其应用尚待大量临床实践的验证, 操作尚待进一步简化。目前,U SP, JP,BP 规定了细菌内毒素测定的定量方法。采用的方法有浊度法、显色基质法。《中国药典》(2000 年版) 法定方法为凝胶法, 附录中收载有细菌内毒素定量检查法的应用指导原则, 采用的是动态浊度法,未涉及具体品种。近年来, 国内有关定量测定的仪器、检测试剂和检测方法的研究已取得了相当大的进展, 有关定量测定法在药品细菌内毒素检查中应用的报道越来越多。在临床检验方面,随着血液前处理方法的标准化和国内血液前处理液的研制生产, 我国内毒素的定量动态检测水平正在逐步提高。[9]

参 考 文 献
[1] 余春 母犬子宫积脓的诊治 养犬,2007年第一期:31
[2] 韩正强,张治成 犬子宫积脓的诊断及治疗 金陵科技学院学报,2005年12月:97-101
[3] 张志强,吕艳丽,薛琴,林德贵 犬子宫积脓的需氧菌调查及药物敏感试验
中国兽医杂志,2005年第3期:40-41
[4] 杨金福 犬子宫积脓的研究 西南民族大学学报自然科学版,2005年5月:第31卷第2期
[5] 曹荣峰,艾洁,安春胜,田文儒 犬子宫积脓的B-超诊断及手术治疗,黑龙江畜牧兽医,2001年第6期:26-27
[6] 钱存中,侯加法 96例犬子宫蓄脓病例诊断研究,甘肃农业大学学报,2005年8月第4期:421-427
[7] 顾春梅 犬子宫蓄脓综合症,宠物医院,1998年第2期:44
[8] 赵洁,贾建伟 内毒素血症的治疗进程 医学综述,2006年1月第
12卷第1期:49-51
[9] 翁建锋,林威,林略 鲎试剂检测食品中内毒素的初步研究 湖北预防医学杂志,2004年底15卷第4期:43-44
[10] 葛业超 细菌内毒素的检测方法及其应用概况 科技信息,2002年第3期:212-213

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