猪流行性腹泻(PED)是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的猪病毒性腹泻疫病，是严重危害养猪业的重要疫病之一，给世界各国的养猪业造成了巨大经济损失。山东惠民县某养猪场发生了以哺乳仔猪水样腹泻、并伴有呕吐等特征的疑似猪流行性腹泻疾病，现将诊治过程报告如下。

　　1、发病情况

　　发现有哺乳仔猪(3-21 日龄)呕吐、腹泻、脱水。同圈仔猪发病率达100%，不同圈发病仔猪死亡率在11.1%-30.0%。用抗生素治疗无效。

　　2、临床症状

　　发病哺乳仔猪普遍精神沉郁，食欲下降，水样腹泻、个别仔猪伴有呕吐，仔猪普遍偏瘦，但体温正常。

　　3、病理变化

　　剖检病死仔猪发现：小肠扩张、肠壁变薄，肠内充满黄色液体，肠系膜淋巴结水肿。

　　4、病毒分离鉴定

　　4.1 病料采集

　　取病死仔猪小肠黏膜、内容物及水样腹泻粪便作为分离病毒的样品，将样品冷冻保存。

　　4.2 病料处理

　　将采集的样品用灭菌PBS 研磨，反复冻融，在4 ℃条件下3000 r/min离心30 min、吸取上清，将上清液用0.22μm 一次性滤器过滤除菌、分装保存于-80 ℃备用。

　　5、病毒的RT-PCR 鉴定

　　5.1 引物设计

　　根据GenBank JN825712.1 序列设计，扩增长度661 bp，用于鉴定猪流行性腹泻病毒。引物序列如下：上游引物：CGGTTCTATTCCCGTT下游引物：GAAGCACTTTCTCACTATC

　　5.2 病毒的RT-PCR

　　提取病料的RNA， 并同时提取PEDV 阴性对照( 细胞培养液) 及PEDV 阳性细胞毒的RNA。病毒RNA用宝生物工程( 大连) 有限公司提供的RNA 提取试剂盒提取，一步法RTPCR反应成分及反应程序如下。

　　RT-PCR 反应体系为：10×Buffer 5μL，MgCl2(25mmol/L) 10μL，dNTPs(10 mmol/L) 5μL，Rn a s e I n h i b i t o r ( 4 0 U/μL) 1μL，A M V R T a se X L ( 5 u / μ L ) 1 μ L ，AMV-Optimized Taq(5 U/μL) 1μL，上游引物P1(20μmol/L)1μL， 下游引物P2(20μmol/L)1μL ， 模板5μL，RNase Free ddH2O up to 50μL。

　　RT-PCR 反应条件为：50 ℃反转录1 h ;94 ℃ 5 min ;进入PCR 循环，94 ℃ 45 S，55 ℃ 1 min，72 ℃ 1 min，35 个循环后，72 ℃延伸10 min。反应结束后，用0.8% 琼脂糖凝胶电泳检测扩增结果。

　　5.3 病毒的RT-PCR 鉴定结果

　　琼脂糖凝胶电泳检测显示，病毒的RT-PCR 扩增产物大小约660 bp，与预期一致(如图1 所示)。回收RTPCR产物，送往上海生物工程有限公司测序。测序结果与GenBank 上报道的猪流行性腹泻病毒序列同源性在96%-99% 之间。

　　6、治疗措施

　　经上述诊断确认病原为猪流行性腹泻病毒。建议该养猪场采取如下措施：

　　6.1 保温及消毒措施

　　建议保持猪舍温度高于正常温度1-2 ℃ ;保持猪舍卫生整洁及全面、定期消毒。

　　6.2 补液，防止脱水措施

　　可以购买正规厂家的优质口服补液盐，让发病猪群普遍饮用。

　　6.3 防止继发细菌感染

　　可用痢菌净防止细菌感染。

　　6.4 高免血清疗法

　　对发病仔猪采用高免血清被动治疗方法。采集发病猪群中痊愈后老母猪血液，制备高免血清：分离血清(注意无菌操作)，在血清中添加一定比例的阿莫西林抗生素。按照仔猪体重，肌肉注射高免血清(建议0.5 mL/kg，1 次/d，连用2 次)。

　　6.5 疫苗接种

　　建议对全场猪群紧急免疫猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻二联活疫苗。高免血清治愈的发病仔猪猪群1 周后进行疫苗接种。

　　该养猪场按照上述治疗措施进行了操作，发病猪群死亡率及发病率大幅降低。实施2 周后病情基本缓解，猪场进入稳定状态。

　　7、小结

　　自2011 年以来，猪腹泻病成为严重危害养猪行业的重大传染病，给养猪业造成巨大经济损失。专家证实猪流行性腹泻病毒是猪腹泻病的主要病原之一。笔者在收到山东惠民某猪场暴发疑似猪流行性腹泻病的疫情后，通过发病情况调查、临床观察及病理剖检，初步判断疫情为猪流行性腹泻引起。收集病料进行病毒分离及RTPCR鉴定，证实病原为猪流行性腹泻病毒。并按照猪流行性腹泻疫情采取防治措施， 经过保温、消毒、补液、防继发感染及紧急免疫接种，疫情得到有效控制。