家兔的配种方法,主要有3种,即自然交配、人工辅助交配和人工授精。
(一) 自然交配
公、母兔混养在一起,在母兔发情期间,让发情母兔与公兔自行交配称为自然交配。这是一种比较原始的配种方法。其优点是配种及时,方法简便,防止漏配,节省人力、物力。但缺点也很多,主要是:
(1) 公兔整日追逐母兔交配,体力消耗过大,配种次数过多,精液质量不稳定,受胎率与产仔率低,公兔易衰老,利用年限缩短。
(2) 无法进行选种选配,极易造成近亲繁殖,品种退化,所产仔兔体质不佳,兔群品质下降。
(3) 公兔之间为争夺母兔易发生斗架,导致受伤甚至失去配种能力。
(4) 配种过早,公、母兔身体尚未发育成熟,不仅影响自身生长发育,而且胎儿也会发育不良。若老年公、母兔交配,可能会发生死胎或早期胚胎流产,即使能正常分娩,所生仔兔体质弱、抵抗力差,成活率也较低。
(5) 容易造成疾病传播。
总之,这种方法弊多利少,在生产中应尽量避免使用。
(二) 人工辅助交配
人工辅助交配是指公、母兔分开饲养,母兔发情时,把母兔放入公兔笼内,在人工辅助下进行交配。这是养兔生产中普遍使用的一种方法。
1. 配种前的准备 家兔在进行人工辅助交配之前,应做好以下几个方面的工作。
(1) 检查: 在配种前应全面检查种兔群健康状况,凡患疥癣、梅毒及其他疾病的种兔,应严格隔离治疗。另外,还要看种兔的膘情、性活动功能、生殖器官是否正常,体质是否健壮。
(2) 剪毛: 为了便于交配,在配种前应将公、母兔生殖器官周围的长毛剪掉,以免妨碍交配或防止将脏物带进生殖器。
(3) 运动: 配种前10天左右,公、母兔应尽可能每天放在场地上运动1 ~2小时,此外在日粮中,除青绿饲料不能缺少外,公兔可喂些鱼粉、麦粉和大豆等; 母兔增喂白菜芽、发芽小麦等。
(4) 检查母兔发情情况,适时配种。
2.人工辅助交配操作过程 人工辅助交配的具体操作步骤如下: 将经检查确认适宜配种的发情母兔放入公兔笼内,在旁观察,确认公、母兔交配是否成功。母兔一进入公兔笼内,公兔随即开始追逐爬跨母兔。当母兔伏卧接受公兔爬跨,并抬尾迎合公兔交配,见公兔前肢紧抱母兔,后躯蜷缩抽动,最后其后肢迅速离开笼底,全身紧贴于母兔后躯上,并发出 “咕咕” 叫声时,则表明公兔阴茎已插入母兔阴道内射精,交配成功。随即公兔从母兔身上滑倒离开母兔,表示交配完成。此时,应立即提出母兔,并用手轻拍其臀部,使其受惊蜷缩,以防阴道内的精液倒溢。然后将母兔放回原笼,做好配种记录。
如果母兔发情不接受交配,但又应该配种时,可以采取强制辅助配种,即配种员用一手抓住母兔耳朵和颈皮固定母兔,另一只手伸向母兔腹下,举起臀部,以食指和中指固定尾巴,露出阴门,让公兔爬跨交配。或者用一细绳拴住母兔尾巴,沿背颈线拉向头的前方,一手抓住细绳和兔的颈皮,另一只手从母兔腹下稍稍托起臀部固定,帮助抬尾迎接公兔交配。
3.人工辅助交配的优、缺点
(1) 优点:
①可人为控制配种次数,减少了种兔体力消耗,延长了种兔的利用年限,有利于公兔的健康。
②由于减少了公、母兔之间的接触,因此,可减少或避免疾病的传播。
③可有计划地进行选种选配,避免乱配,防止早配。
(2) 缺点: 与自然交配相比,花费的人力、物力较多。
(三) 人工授精
家兔的人工授精是指采用人工的方法获取公兔的精液,再将精液经体外的品质检查、稀释后,输入到发情母兔生殖道内,使其受精妊娠,获得后代的一种配种方法。
1.人工授精的意义 其优点在于能充分利用优良种公兔,提高兔群质量,迅速推广良种,还可减少种公兔的饲养量,降低饲养成本,减少疾病传播,克服某些繁殖障碍,如公、母兔体型差异过大等,便于集约化生产管理。但需要有熟练的操作技术和必要的设备。
2.主要器材和药品 采精器: 外壳长12~14厘米的硬塑或胶管 (可用避孕套代替),长为外壳的两倍; 集精瓶; 输精器:2毫升注射器,乳胶细管,塑料输精管; 低倍显微镜; 消毒用乙醇; 稀释液 (最简单的是用5%生理葡萄糖盐水); 促排卵激素等。
3.家兔人工授精操作程序
(1) 采精:
①采精前的准备。家兔常用的采精方法是假阴道法采精。兔假阴道由外壳、内胎、集精杯和活塞4部分组成。外壳为一中空管,用塑料管或橡胶管制成,长为5~6厘米,内径为3厘米左右; 内胎以较薄的乳胶管为宜,生产中多以人用避孕套 (截去盲端) 代替; 集精杯可用翻口玻璃小试管,也可用青霉素小瓶代替。假阴道在安装前、后都要认真检查,有无破损。然后用70%的乙醇彻底消毒内胎,待乙醇挥发后,再安装集精杯,最后用0.9%的氯化钠溶液冲洗2~3次。安装好的假阴道,冲洗消毒之后,用小漏斗灌入50~55℃的热水15~20毫升,然后测定假阴道内的温度。公兔适宜射精的温度为40~42℃。再用小玻璃棒擦涂少量消过毒的白凡士林油或液状石蜡作润滑剂。最后从活塞充入气体,调节其压力,使假阴道内层靠拢呈 “Y” 形,即可用来采精。
②采精方法。公兔须经训练才能采精。训练的方法是首先选择体质健壮,性欲旺盛的公兔,实行公、母兔隔离饲养; 经常接近公兔,训练公兔的胆量,使其不至于惧怕人而跑掉; 定期让公兔与母兔接触,但不准交配,以便提高公兔的性活动功能。这样经数日之后,将发情母兔放入公兔笼中,用右手固定母兔的头部,左手握假阴道置于母兔两后肢之间。当公兔爬跨母兔交配之际,把握假阴道的左手,使母兔后躯举起,待公兔阴茎挺出后,再根据阴茎挺出的方向调整假阴道口的位置。当公兔阴茎一旦插入温度、压力适宜而且润滑的假阴道口时,公兔前后抽动数秒钟,即向前一挺,后脚蜷缩,向左侧倒去,并伴随 “咕咕” 的一声尖叫,这就是射精的表现。
训练公兔用假阴道法进行采精,一般性欲较强的公兔,经过几次训练之后,便可顺利采取精液。或者用兔皮做一假台兔,甚至操作者戴一兔皮手套,握住假阴道,均可顺利达到采精的目的。特别是经用假阴道采精训练成习惯的公兔,看到采精人员穿好工作服,准备采精时,即主动跟随前后不离,等待采精。
③采精频率。尽管公兔睾丸产生精子的能力很强,但也不能频繁采精,一日之内,1~2次为宜,连续5~6天之后,最好休息1~2天,以便保持公兔的性欲和优良的精液品质。
(2) 精液品质检查: 进行兔的精液品质检查时,应在18~25℃的室温环境中为宜,并在采精后立即进行。检查的主要内容包括射精量、色泽、pH值、精子活力、密度和畸形率。
①射精量。公兔的射精量可直接从集精杯读取,集精杯上无刻度时,可倒入带有刻度的量筒内读取,用吸管量取更为准确。公兔射精量一般为0.5~1.5毫升,与品种、体型、饲养管理和采精技术有关。
②颜色。正常的成年公兔的精液呈乳白色或灰白色,混浊不透明。凡有红、黄等颜色为不正常颜色。
③pH值。精液的pH值可用pH试纸测定,也可用光电比色计测定。公兔正常的精液pH值一般为6.8~7.3。如果pH值偏高,可能是公兔的生殖器官有疾病,不能用于输精。pH值偏高的精液,精子代谢和呼吸增强,耗能增多,不易保存并影响受精能力。
④精子的活力。精子的活力,就是前进运动的精子数占总精子数的比率。它是影响母兔受胎及产仔多少、评定公兔种用价值的重要指标,公兔精子活力强,则母兔受胎率高,胎产仔数也多。
检查时,用消过毒的玻璃棒取一滴精液于干燥、清洁载玻片上,加上盖玻片置于100~400倍显微镜下观察。采用 “十级制”计分法,凡视野下,100%精子呈前进运动,活力为1.0级,90%精子呈前进运动的,活力为0.9,80%的为0.8,以此类推,全部精子无一呈前进运动的,活力为0。
精子的活力受温度的影响很大。温度过高时,精子活动加强,养分消耗快,死亡也快; 温度过低时,精子活动缓慢,活力表现不充分,甚至发生冷休克,使评定结果不准确。因此,检查精子活力时,应把显微镜置于局部温度为37~40℃的恒温台或者保温箱内。
公兔的鲜精活力通常为0.7 ~0.8。为了保证其较高的受胎率,用以输精的常温精液的精子活力在0.6以上,冷冻精液解冻后精子活力在0.3以上。
⑤精子密度。是指每毫升精液中所含精子的数量。测定精子密度的方法有估测法、计数法、光电比色法等。
估测法: 直接观察显微镜中精子稠密程度,依据精子间隙大小评定。凡视野下所观察精子之间无间隙,其密度定为 “密”,视野下所观察精子之间能容纳1~2个精子,其密度为 “中”,视野下精子之间的间隙能容纳2个以上精子,密度为 “稀”。用于输精的精子密度必须在 “中” 级以上。
计数法: 是借助血球计数板精确算出单位体积精液中的精子数量。精子计数室长、宽各1毫米,面积为1平方毫米,高度0.1毫米,体积0.1立方毫米,由双线或三线组成25个 (5×5)中方格,每个中方格内有16 (4×4) 个小方格,共计400个小方格。
取白细胞吸管,吸取公兔精液至“0.5” 刻度处,将吸管外壁的精液拭去,再吸取3%的氯化钠溶液至“11” 刻度处,以拇指、食指分别按住吸管两端,充分振荡混合,然后弃去吸管前段数滴精液,小心地将吸管中的精液沿计数板与盖玻片之间空隙的边缘加入计数室。选择位于对角线上(或4角) 4个中方格,加上中央1个,共5个中方格。依次计数5个中方格的精子数。计数时,以精子头部为准,凡精子头部在方格边缘者,遵循“数上不数下,数左不数右” 的原则,以免遗漏或重复计数。
最后,计算精子密度:
精子密度=5个中方格总精子数×5×10×1000×20 (稀释倍数)
在此,精液稀释倍数为20倍,故应乘以20。
光电比色法: 此法是利用精子的透光性 (混浊度) 测定精子密度。精子越多,精液越浓,透光性越低。这也是较可靠的测定法,其中比较准确的一种方法是利用光电比色计进行测定。
⑥精子畸形率。精子畸形率是指畸形精子占总精子数的百分比。畸形精子主要有双头、双尾、大头、小尾、无头、无尾、尾部蜷曲等。检测方法: 做一精液抹片,自然干燥后,用红 (蓝)墨水或0.5%甲紫乙醇溶液或5%伊红水溶液染色3~5分钟,再用清水轻轻冲洗并晾干,置于400~600倍显微镜下,随机数出不同视野500个精子中畸形精子数。正常精液中畸形精子数应低于20%。
(3) 精液稀释: 稀释是指将稀释液和精液充分混合在一起,通过稀释不仅可以扩大配种数量,而且可以供给精子营养,中和副性腺分泌物对精子的有害作用,缓冲精液的酸碱度,为精子创造更适宜的外界环境,从而增加其生命力,延长存活时间,便于更好地发挥优良种公兔的作用。
①确定稀释倍数。
精液的稀释倍数= (精子密度×精子活力) /每次应输入的有效精子数
例如: 某公兔精液的精子密度为1.5×108个/毫升,活力为0.8,每只母兔每次输入的有效精子数为107个,计算该精液的稀释倍数。
精液的稀释倍数= (1.5×108×0.8) /1×107=12
②精液稀释液的配制。常用的兔精液稀释液有以下3种:
生理盐水稀释液: 每100毫升生理盐水加入青霉素、链霉素各10万单位。
牛奶稀释液: 将10%的奶粉液在水浴锅中加热至95℃或沸腾,保持15~20分钟,冷却至室温后用4~5层纱布过滤,每100毫升加入青霉素、链霉素各10万单位。
葡萄糖稀释液: 取精制无水葡萄糖7克,加蒸馏水100毫升,在水浴锅中加热煮沸15~20分钟,冷却至室温后,每100毫升生理盐水加入青霉素、链霉素各10万单位。
③稀释的方法。稀释精液时,应将精液与稀释液置于同一温度 (30℃左右) 下,精子活力在0.6以上、密度中等的精液与稀释液的比例以1∶(4~5) (容积比) 为宜。兔精液适宜的液态保存温度为0~10℃,时间为2天内使用。要求保存环境不得有有害气体,避免让阳光和紫外线等直射精液。精液稀释后应逐步降低温度。
(4) 精液的保存与运输: 精液经过稀释处理之后,可以存放在一定的恒定环境中,保存一定时间后为母兔输精,仍能保持正常的受胎率。通常保存精液的方法有3种: 现采现用时,精液保存在30℃左右的环境中即可; 若存放4~8小时,可保存在15~20℃的室温环境中; 若需较长时间保存,则需先缓慢降低温度,再放入0~5℃冰箱中。据实验观察,饲养管理较好的公兔,性欲旺盛,其精子的生存时间可达200小时以上。
若需将公兔精液运送到异地时,可根据两地距离和运输时间,确定采用什么方法保存精液。在运输过程中,要保证精子所处的环境温度恒定,不能起伏变化太大。另外,要防止精子受到剧烈振荡,致使精子活力下降,畸形率增加。
(5) 输精措施:
①排卵处理。母兔的排卵是交配或性刺激以后约10小时开始的,因此在给母兔进行输精之前,应先作刺激排卵处理,才能达到受精怀胎的目的。最理想的办法是刺激排卵法,就是用结扎输精管,失去受精能力的公兔与母兔交配。
②输精方法。输精用具可借用羊的输精器或用1毫升容量的小吸管安上一个胶乳头使用。输精的方法有两种: 一种是操作者左手握紧兔耳及背皮,将腹部向上,臀部放在桌上,右手持准备好的输精器,弯头向背部方向轻轻插入阴道6~7厘米深处,慢慢将精液注入,然后再以右手轻轻捏其阴部,增加母兔快感,从而加速阴道及子宫的收缩,这样可以避免精液逆流。另一种方法,由助手将母兔保定,操作者左手提起兔尾,右手将输精器弯头向背部方向插入阴道,然后将精液注入阴道深部。
4.提高兔人工授精效果的关键技术
(1) 精液品质良好: 要想获得理想的配种效果,必须有品质良好的精液,只有经过镜检确认品质良好的精液才能用于输精。
(2) 严格消毒: 在人工授精过程中使用的所有器具、药品都必须清洗干净,严格消毒。输精器在吸取精液之前,先用35~38℃的稀释液或冲洗液冲洗2~3次,然后再吸入定量的精液为母兔输精。在给第一只母兔输精后,插入阴道部分的输精管,应用消毒纱布或脱脂棉花擦净污物,再用70%的乙醇棉球消毒,最后再用浸湿冲洗液的纱布或脱脂棉花擦拭,方可再吸精液。母兔的外阴部,在输精前,亦要用浸湿1%氯化钠液的纱布或棉花擦拭干净。如果消毒不严 (包括人工授精需用的稀释液),不仅影响精液品质,影响受胎率,还可导致母兔患生殖道疾病。
(3) 正确选用促排卵激素: 兔为刺激性排卵动物,发情后不经交配或药物刺激是不会排卵的,因此,在输精前必须刺激母兔排卵。目前有两种方法:
①激素促排。常用的有人绒毛膜促性腺激素 (HCG) 或促黄体素 (LH),每次静脉注射50国际单位,在注射后6小时内输精。据报道,用促排卵素2号做静脉注射后立即输精,可取得50%~55%的受胎率。也可用促排卵素3号 (LHRH-A3),输精前肌内注射0.5微克即可。
②试情公兔刺激排卵法。用结扎输精管的试情公兔进行刺激排卵,成本低,方法简便,还可避免母兔因长期注射激素而导致母兔难孕的不良后果。
(4) 输精部位准确: 母兔膀胱在阴道内5~6厘米处的腹面开口,大小与阴道腔孔径相当,而且在阴道下面与阴道平行,在输精时,易将输精管误插入排尿口,而将精液输入膀胱; 如输精管插入过深又易将精液输入一侧子宫 (兔为双子宫动物),造成另一侧空怀。因此,在输精时,应先将输精器朝向阴道背壁插入6~7厘米深处,越过尿道口后再转向腹面,直至插入8~10厘米深处的子宫颈口附近,边输边退,使精子自子宫颈能同时进入两个子宫内,有利于提高受胎产仔数。
(5) 器械要及时清洗: 凡采精、输精及有关器皿,用后要立即冲洗干净,并分别置于通风、干燥处,或放于干燥箱中备用。